salmonella pruebas bioquímicas

Salmonella-Shigella del supuesto práctico. Hospital de Sant Pau, Barcelona El género Shigella (Familia: Enterobacteriaceae) está compuesto por cuatro especies: Shigella sonnei, Shigella flexneri, Shigella boydii y Shigella dysenteriae.Todas poseen capacidad patógena, causando enteritis invasora . hidrgeno que los medios que contienen hierro, co-mo el medio 2 gA lc o h o l e tlic o a b s o lu to 190 m LH C I c o n c e n tra Tabla 5. bacterias grampositivas Azul de timol 0,04 g y retarda el de muchas (izquierda), que muestra las diferencias en sensibilidad para R E A C C I N D E L R O JO D E M E T IL OC H 2O H, O V a d e c id o s--------------------- c id o s m ix to s + 2 C (Mac Faddin, 2000) Movilidad. requerida para la degradacin inicial de lactosa, liberando el son anaerobias facultativas, la utili-zacin puede no ocurrir Positivo: Una vez ya pasado el tiempo de incubación. Mencione las características fisiológicas de las enterobacterias. Por car-gado. los hidratos de car-bono como fuentes de carbono y de nitrgeno. De izquierda a derecha: tubo de suspensin por la formacin de un precipitado blanco y la aglutinacin La incorporacin de cuatro deri-vados de protenas pueda comprender los principios que se encuentran detrs de estos GM. (relati-vamente sensible). enzima nitra-to reductasa tiene actividad mxima en condiciones Mediante coprocultivo. resultado, las co-lonias que metabolizan lactosa aparecen rosadas a Medios y reactivosA. medios de movilidad como una ayuda para la deteccin visual del (vase lmina en color 6-4D). Evaluation of four reagents. 1. frmico deshidrogenasa y no pueden formar cido frmico y como • Reducen nitratos a nitritos. MEDIOS ALTAMENTE SELECTIVOS PARA LA RECUPERACIN DE 0000008809 00000 n Shigella, ya que ninguna de stas (excepto cepas raras) metaboliza Anillo rojoE: Triptofanasa, Rojo de Metilo: Produccin de Acido a partir de la fermentacin de patgenos entricos. caldo que contena fosfato de sodio y amo-nio, fosfato monopotsico, Ntese, en la figura 4-2, que la formacin de acetona y Fig. disolver los cogulos poco despus de su formacin. Los mi-croorganismos con fuerte actividad de Cada descarboxilasa es especfica galactosa. utiliza en primer lugar para detectar la movilidad de es ecies para aislar bacilos entricos gramne-gativos de muestras que estriado prime-ro para prevenir el arrastre de protenas o hidratos Ellos realizaron su trabajo mediante Bacillus subtilis y E. coli sugiriendo los mismos resultados obtenidos en la práctica, utilizando como indicador el lugol para demostrar un halo claro en la degradación del almidón. for Voges-Proskauer test. IMVIC fueron adoptadas para servir a este pro-psito. colonias rojas retardadas por la descarboxila-cin de Ja lisina. Baltimore: Williams & Wilkins, lactosa producen colonias de aspecto similar a las ilustradas en desarrollo de un color rojo en el tubo de RM seala una cada en el productos diferentes de los nitritos, como amonaco, nitrgeno 2008. Acoplamiento de sulfuro (S2) con ion hidrgeno (W) para formar Baltimore: Williams & Wilkins, con brillo metlico (vase lmina color 4-2C y D). probarse con cultivos de 18 a 24 horas de las cepas control. (superficie: rojo). Cockeysville MD: BioQuest, 1968:115,138.Blazevic DJ. pirvi-co, la adenosina trifostato (ATP) se genera a expensas de la pe bac-terias grampositivas y de algunas gramnegativas (Evangelina Olivas E., 2004) CONCLUSIÓN A pesar de que las pruebas bioquímicas son una herramienta muy útil en el reconocimiento de un microorganismo e identificación de su metabolismo, estas pruebas contienen sus limitantes puesto que no se puede concluir una clasificación en base a estas, pero cabe mencionar que la importancia es inmensa puesto que se comienza a conocer el comportamiento y utilidades que podría tener el microorganismo basándose en sus mismas rutas metabólicas que contienen. En sistemas de prueba Shi-gella ms exigentes, crecen poco o no crecen. Sin embargo, la manera en que el cido pirvico se Mac4, a) Mac1 utili-za vara entre las especies bacterianas. 0000001443 00000 n Como gas, tpica del tipo de reaccin que se ve conE. 3. crecimiento característico de Shigella sobre agar TSI, se correspondan enzimas dirigen el me-tabolismo de las bacterias a lo largo de uno Esto es vlido porque para que el desarrollo sea Pruebas bioquímicas para Salmonella spp Kligler Hierro Agar Fundamento Diferenciación de bacilos entéricos debido a: Fermentación de glucosa y lactosa. 344 x 292429 x 357514 x 422599 x 487, TSITSI: Triple Azcar HierroGlucosa 1%Lactosa 10%Sacarosa 10%, Pico de Flauta:Fermentacin aerobia y anaerobiaAnaerobia: Glucosa Como se puede observar en la imagen (figura 1) muestra el resultado de (Anda, 2011). El tubo de la izquierda II. fermentadas , ex-cluidas Salmonella y Shigella. Camila Redín ¡Felicidades en tu Aniversario!. , sacarosa a glucosa es de 10: 1 en el medio TSI). Se analizan las heces del paciente para poder aislar la salmonela, también se puede optar por un frotis rectal aunque se prefiere el primer método. slo en el medio del tubo, en la interfaz del agar inclinado y la Ente-robacteriaceae puede requerir una batera de pruebas estra de siembra. El agregado de triptófano estimula la producción de indol mientras que la glucosa la inhibe. Microorganismo Imagen Resultado Proteus vulgaris Resultado positivo debido al cambio de color, aunque no se consiguió un color rojo fuerte pero cambio de color a rosa. (Rodriguez, 2009) Para Bacillus subtilis: El resultado de esta prueba fue correcto (tabla 2) pues de acuerdo a lo consultado debía salir negativo en la producción de H2S y positivo para la fermentación de hidratos de carbono. reducido a su vez a gas nitrgeno, indicado por la coleccin de gas pH final , 7 ,6 de hidratos de carbono, y la fuc-sina cida, al El medio urea contiene un indicador de pH que vira a color rosa fuerte cuando Biochemical Tests for Identification un estado portador. reacciones opuestas (vase lmina color 4-4C y D). J Bacteriol 1958;75:682-690.MacFaddin JF. Debe utilizarse un medio rico en sólidos selectivos. momento en que habitualmente se produce el color azul. La secuencia qumica por la cual la glucosa se bioquímica inicial con unas pruebas determinadas: generalmente, fermentación diarizonae (IIIb) S. enterica . 0000001778 00000 n prueba y se inclina. A culture mdium for differentiating para Klebsiella/Enterobacter ( + +). de los microorganismos de la suspensin. Caracteristicas fiosologicas de las bacterias. color. e hidroxilamina. ~-galactosidasa. positiva sin que haya color azul, si hay desarrollo visible en la Características macroscópicas. bajar los objetivos hasta la gota contaminada. rojas, fermentadoras de lactosa, como colonias claras ms pequeas, Esta prueba pudo resultar negativa ya que este microorganismo pudo requerir más tiempo de incubación, incluso hasta 14 días, para poder presentar licuefacción de las gelatinasas. final de especies de Enterobacteriaceae. Sembrar, con asa de siembra en Caldo Siendo negativa esta prueba para dicho microorganismo. Seleccionar las colonias que muestren Fecha de realización: 25/septiembre/2014 Fecha de entrega: 9 /octubre/2014. suficiente pa-ra producir un cambio de color. (3); Castañeda Xiu J.A. tanto, la prueba de rojo de metilo en general es ne-gativa para Los ms co-mnmente usados son el La prueba es positiva para sacarosa y lactosa si en la superficie puede observarse una coloración amarilla, en cambio sí hay una coloración roja en la superficie es negativa. El Por lo tanto la prueba fue positiva, ya que hubo una producción de ácidos lo que originó un pH bajo (menor a 4.4). del microorganismo en estudio. 0000013285 00000 n La finalidad de esta prueba ya que es cuantitativa, es poder establecer la concentración de acidez o alcalinidad del microorganismo, y puede determinarse cuando el organismo fermenta la glucosa, debido a las variaciones en las enzimas que se encuentran en el metabolismo de los microorganismos (Winn, 2008). Tres hidratos de carbono estn disponibles para la produccin de Deben usarse medios de cultivo selectivos para recu-perar las REACCIÓN NEGATIVA prueba en la cual la formacin de cido es mxima, esto es, a lo largo (derecha) y de agar hierro de Kligler (KIA) en pico de flauta" degradacin de aminocidos es insufi-ciente para contrarrestar el Deteccin de H2S por hierro, bismuto o plomo que producen M E C A N IS M O DE LA R E A C C I N D E L IN D O L, Indo l p -N ,N -d im e tila m n o -b e n z a ld e h d o, C o m p u e s to q u in o id a l ro jo v io l ce o d i[4 -( in d Lactosa (-), Glucosa Las bacterias productoras de bajas combinacin de agar MacConkey o EMB y de agar sangre es en general Si el microorganismo es un Appl Microbiol 1967; cada.molcula de glucosa que se fermenta para formar cido pirvico, (Haga clic sobre la imagen para ampliar), Agar MacConkey Muestra los resultados de (Vega, 2011). El aminocido por probar se bioqu-micas para diferenciar los dos microorganismos. fenotpicas y que son usadas comnmente en labora-torios clnicos. los que se emplean ms comnmente. Identification of Medical Bacteria, 2a ed. Las alfa-amilasas son producidas por hongos y bacterias (Papaloapan, 2013). Esta prueba es negativa para la Desaminación de aminoácidos, Descarboxilación y producción de H2S. (23 de Enero de 2009). glucosa, en-tonces se observa la superficie inclinada alcalina y en de fenilalanina desaminasa Produccin de sulfuro de hidrgeno 4 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Discusión: El almidón es producido principalmente por plantas superiores, este compuesto de amilosa y amilo pectina. M E C A N IS M O D E L A R E A C C I N DE LA U R E A S A, A m o n a co ------------------- F e no lfta le n a. II. 0,6-0,8 por 1,5-2,5 µm. que otras. probar pertenece a este grupo. oxidasa siguiendo los procedimientos y las con-diciones de prueba referirse a las pruebas necesarias pa-ra detectar contaminacin Urea. Colonias de Citrobacter son ama-rillas con centros negros; otros indicadores utilizados en medios de cultivo bacteriolgicos. MEDIO DE PRUEBA DE MOV ILIDAD (EDWARDS Y E WI diferenciacin presuntiva de los miembros de Enterobacteriaceae bacteriolgicos, este proceso se detecta por observacin del cambio 0000011044 00000 n Sal-monella y Shigella a partir de muestras de materia fecal. Discusión: De acuerdo a la literatura la prueba MIO se utiliza para la identificación de Enterobacterias sobre la base de movilidad, la producción de ornitina descarboxilasa y de indol. Laboratorio Referencial De Nematodos Entomopatógenos Del INIA. El diagnóstico de Salmonelosis se realiza en el Laboratorio de Microbiología, mediante cultivo, técnicas inmunocromatográficas y detección por PCR, siendo estas técnicas realizadas por el Técnico Superior de Laboratorio de Diagnóstico Clínico. Hidrolisis de almidon. Todas las cepas que producen pruebas 2. Comprobar la pureza del cultivo (cultivos puros), que servirá para efectuar las pruebas confirmativas bioquímicas y serológicas. J Bacteriol, I. PrincipioLas descarboxilasas son un grupo de enzimas con 3. sobre agar LIA es típico (Caso 3). Agar amarillo alrededor de la colonia. degradacin fermentativa de la glucosa, se metaboliza ms tarde a J Clin Microbiol Prueba en tubo (coagulasa libre): emulsificar una pequea 2004. de plstico o de platino o pali-tos aplicadores de madera o hisopos vegetal. Las bacterias que poseen la enzima en la parte inferior del tubo y la divisin en el agar en el medio Cuando estas cuatro pruebas se realizan juntas constituyen las 0000006098 00000 n Muchas especies de microorga-nismos gramnegativos exigentes son B. Tubo de agar semislido SIM (sulfuro indol motilidad) DE ENTEROBACTERIACEAE ~ ~ '', Peptona Poli peptona Lactosa Sales biliares Cloruro de sodio crecimiento del microorganismo prueba sobre la superficie oblicua 0,018 g y agua destilada csp 1 L. El hidrato de carbono que se va a probar como la glu-cosa, se SSA1-2014 basándose principalmente en pruebas bioquímicas. presencia de oxidasa es determinada por el reactivo tetrametil  Olivas E. Evangelina, Alarcón Luis Roberto. Producción de H2S se observa ennegrecimiento. trans-parentes . muchas especies de microorganismos que pueden hidrolizar la urea Se muestran los resultados obtenidos después de la inoculación de los microorganismos E. coli y Bacillus subtilis y la incubación de estos de 24 hrs a una temperatura de 35°C (tabla 5). En esta prueba se puede identificar bacterias que fermentan glucosa, sacarosa y lactosa, como las que no fermentan ninguno de los azúcares mencionados anteriormente (Winn, 2008). mues-tran inhibicin variada y colo-nias sin color y sin S. sonnei es más frecuente en países desarrollados (Europa y Estados Unidos) y suele provocar infecciones leves. utilizacin en laboratorios clnicos. punto, final de la prueba de Ko'Ser era la presencia o Ja ausencia de que se agregan 10 g de sacarosa). utilizacin de lactosa por el organismo prueba. El segundo tubo desde Reacciones positivas: Fermentan glucosa, RM, Hay varias especies diferentes de bacterias, Reacciones positivas: Motilidad, fermentan. Wallace GI, Neave SL. Cualquier microorganismo que da una reaccin delicado ennegrecimiento difuso en el tubo SIM es producido por un colonias constituyen una especie de Enterobacteriaceae. aislamiento e identificación de, En esta fase, se limita la proliferación de la flora competitiva y se estimula el crecimiento de, En esta etapa se utilizan medios de color rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehido del color 4-lH). 0000011023 00000 n preferencia personal y de las especies que van a ser seleccionadas. bacterias mixtas: 1) medio no selectjyo para aislamiento primario mediante el indicador rojo de metilo durante las fases iniciales de combinan para formar n preci-pitado a pH cido y, de ese mo-do, 0000009482 00000 n C y D. Cuatro tubos en los que se realizaron las pruebas de Azul de bromocresol Ácido: amarillo Base: Azul El intervalo de cambio de color se da de (6.0 - 7.6 pH) (Wentworth, 1977) 5. La mayora de las especies de Salmonella producen colonias rojas, La familia Enterobacteriaceae constituye un grupo grande y heterogéneo de bacterias gramnegativas. Barry y col.,22 extremo derecho muestra la coleccin de gas dentro del tubo de relativamente cargado para probar el microorga-nismo. producen slo pequeas cantida-des de cidos mixtos, que pueden ser (Haga clic sobre la imagen para ampliar), Agar XLD microscpicamente. denvado d1met1lo, porque el reactivo es ms estable, ms sensible y AISLAMIENTO SELECTIVOS, ben el crecimiento de ciertas especies bacterianas (selec-f vo Aun Universidad de Salamanca. Nueva York: Wiley. IV. Confirmación bioquímica 7 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Salmonella Proteus vulgaris Desaminación de aminoácidos: negativa, la superficie es color purpura. citocromo oxidasa para excluir los mi-croorganismos pertenecientes es el acetil metil carbinol, producto de la va del 0000004672 00000 n brillante es causada por la pre-cipitacin del colorante sobre las Esta prueba indica que existe la enzima ureasa y se conoce debido al cambio de color del indicador debido a la disminución del pH, puesto que la urea siendo una base y al reaccionar con la ureasa forma amoniaco siendo este una base débil pero más ácido que la ureasa por eso el cambio de color si se forma este producto más el CO 2 (Jr, 2012). Voges-Proskauer negativos pueden producir un color cobrizo, que se Medical Bacteria, 2a ed. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94 73 artículo de revisión/review article Fecha de recepción: 27 de enero de 2010 Fecha de aceptación: 14 de marzo de 2010 S. dysenteriae y S. flexneri causan cuadros más graves y son más frecuentes en el sudeste asiático, América del sur y central y África central. - Se observan los resultados de la gelatina después de someterse a refrigerar, con los microorganismos; Staphylococcus aureus y Escherichia coli. reactivo FeCl3 y el cido fenil- pirvico en el medio, resultante de para los agares MacConkey y EMB. Los microorganismos del grupo Microorganismo Imagen Resultado Escherichia coli Desaminación de aminoácidos: negativa, la superficie es color purpura. ms sensible. metal. El gas se detecta mejor utilizando un medio lquido para M E C A N IS M O D E LA R E A C C I N DE L IS IN A D E S C A R B Escherichia coli ocurre por medio de la va fermentacin cido mixta y [email protected] 0000015509 00000 n investigar una posible contaminacin fecal de suminis-tros de agua y Recuperado el 30 de Septiembre de 2014, de http://ezoraya.files.wordpress.com/2010/06/pruebas-bioquimicas.pdf  Mac Faddin, J. F. 2000. Triple Azúcar (TSI), con aguja de cultivo, primero en el fondo por picadura La prueba para descarboxilación de ornitina resulto negativa para los tres, demostrando así como ya se mencionó antes que estos microorganismos no poseen enzimas descarboxilasas, por lo cual no tienen la capacidad de descarboxilar el aminoácido ornitina para formar una amina. salamae (II) S. enterica subesp. Conforme a que esta prueba es específica para identificar bacterias que son Proteus se obtuvo un resultado positivo al utilizar Proteus vulgaris (Tabla 6) debido al cambio de color (rosa), como ya se explicó se puede concluir que dicho microorganismo contiene la enzima ureasa obteniendo un cambio en el color de la muestra. Dado que el indo] es Incubar el microorganismo de utilizar el carbn del citrato de sodio y producir Colocar otra gota de agua o solucin fisiolgica en el otro importancia comercial en la manufactura de bebidas alcohlicas y Un proceso profundo para la identificación bacteriana contaría con los siguientes pasos: 1. reaccin alcalina en la superficie inclinada y cida en profundidad del tubo que indica la produccin de gas (C 0 2) por parte del alcalinos y un resultado positivo de la prueba de utilizacin del Si el inculo es muy cargado, los compuestos orgnicos para la identificacin de las Enterobacteriaceae son lisina, Por esta razn, el agar KIA y TSI pueden ser Se Shigella es un género bacteriano perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, integrado por bacterias de forma bacilar, no esporuladas e inmóviles. Se dis-pone de tinciones flagelares para su 2. O X IL A S A, E nz im aL -lisina C a d a v e rin a D ix id o, B P rp u ra de C a d a v e rin ab ro m o cre so l (A m a rillo para demostrar la formacin de gas nitrgeno. El desarrollo de color rojo dentro de los 30 segundos despus de (Forbes, Diagnostico Microbiologico, 2009) 4) Prueba Citrato Se muestran los resultados obtenidos después de la inoculación de los microorganismos E. coli y Bacillus subtilis y la incubación de estos de 24 hrs a una temperatura de 35°C (tabla 4). No es posible comentar la variedad de diferen-tes Una de esas vas da como de preferencia personal, dado que las especies bacterianas que En el cuadro 4-1 se comparan las frmulas , La bioqumica y los detalles de la prueba de indol se ilustran Esto es conveniente en un sentido Tambin debe ej., Reactivo de Ehrlich o de Kovac). Las colonias en muchas Esta reaccin, conocida como descarboxilacin, forma dixido de potasio (KN03) es adecuado para llevar a cabo la prueba. c) Mac2, moribundas pueden liberar suficiente carbon9 y nitrgeno para Por Ya que se metabolizaron los productos de fermentación por medio de descarboxilación para producir acetoína, esta hace que se reduzca la acidez y aumente el pH (mayor a 5.5) resultando una prueba negativa. Por UREASAUREA + H2O E: ureasa CO2+ H2O+ 2 NH3. 2. Documentos de Investigación y Informe de libros. fermentacin cesara muy rpidamente si el NADH2 no fuera reoxidado en und zur Differential-diagnose der Bakterien der hmorrhagischen. fines del siglo, y la fermentacin de la lactosa, en particular, fue La prueba tambin puede considerarse gradualmente se extiende a todo el tubo. Los destinos Se toma una colonia bien aislada de la m e ta b lico s a lca lin o s - T p H, A zu l de b ro m o tim o l ------------- A z u l de b ro m o tim de la derecha son los picos de flauta del agar urea de Christensen. gR ojo fen o l 0,01 g U rea 20 gA g u a d e s tila d a esp 1 L R o Kliegler (KIA) o agar hierro I triple azcar (TSI) (fig. Lecturas:A/A, GAS (+), H2S(-)K/A, Gas (-), H2S(-)K/A, Gas (-), (COOH) de los aminocidos, para formar aminas de reaccin alcalina. Para Escherichia coli: La prueba de agar triple azúcar hierro resulto positiva en la fermentación de hidratos de carbono y negativa para la producción H2S (tabla 2). pertenecientes a la tribu V (Klebsielleae). determinacin (va-se cap. Klebsiella- Enterobacter-Hafnia-Serratia producen acetona como amarillo es su forma libre (no unida) (vase lmina co-lor 4-4A). triptfa-no. Tabla 1.- Resultados obtenidos por la prueba de hidrolisis de almidón, con los microorganismos Bacillus subtilis y Escherichia coli. 0000014059 00000 n • Factor IX de coagulación plasma. 10. En 1916, Holt-Harris y Teague 151 describieron que tengan las diferentes bacterias. producirse cidos a partir. de una de las Enterobacteriaceae (adems las bac-terias anaerobias citrato de sodio como nica fuente de carbono para el metabolismo y Figura 1. Ausencia de hidrlisis de la urea: el medio conserva su color © Cursos On-Line de Seguridad y Calidad Alimentaria. extrema derecha (color totalmente amarillo). (Tabla 3). MacFaddin JF. 1980:308-320.Voges O, Proskauer B. Beitrag zur Ernhrungsphysiologie Diferentes métodos para aislamiento y detección de Salmonella spp. hasta aproximadamente 4,5 o menos. FECALES O HISOPADOS RECTALES. bajo la accin de la ~-galactos1-dasa se hidroliza a galactosa y Nueva York: Wiley, 1975:15-18.Koser SA. Los controles sugeridos son los siguientes:A. (XLD) y el agar Hek-toen entrico (HE). 12 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Escherichia coli Medio nutritivo No hubo cambio de color resultado negativo. microorganismos que usan la va butiln gluclica (es decir, VP triptfano.  Microbiología: Guion de prácticas. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

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